بررسی کاستهای ژنی اینتگرون کلاس 1، شناسایی ژن های مقاومت به تتراسایکلین(a-d) و ژنوتایپینگ ایزوله های بالینی مقاوم به تتراسایکلین انتروپاتوژنیک اشریشیاکولای

انتروپاتوژنیک اشریشیا کلی (epec=enteropathogenic escherichia coli) به عنوان مهم ترین عامل اسهال در کودکان است. پاتوژنز انتروپاتوژنیک اشریشیاکلی که پاتوواری از اشریشیاکلی است لزیون های a/e (attaching and efacing) است که در بیوپسی روده بیمار نیز دیده می شود. این لزیون ها توسط ژن هایی کد می شود که روی جزیره ژنومی lee (locus of enterocyte effacement) قرار دارد. شناسایی epec با استفاده از تشخیص این ژن به وسیله پرایمر های اختصاصی صورت می گیرد. ژن bfpa کدکننده bundle-forming pili برای تمایز سویه های تیپیک و آتیپیک epec از هم استفاده می شود. هدف این شناسایی epecهای تیپیک و آتیپیک و بررسی حضور ژن های مقاومت به تتراسایکلین و تعیین کاست های ژنی اینتگره شده در اینتگرون کلاس یک و دو و ژنوتایپینگ ایزوله های مقاوم به تتراسایکلینepec است. تعداد 349 اشریشیاکلی جدا شده از کودکان که با استفاده از تست های بیوشیمیایی تایید شده اند، در این مطالعه مورد بررسی قرار گرفته اند. تشخیص سویه های epec با استفاده از روش pcr و پرایمرهای اختصاصی ژن eae وstx انجام شد. سپس ایزوله ها از لحاظ وجود ژن های bfpa و مقاومت به تتراسایکلین(a-d) و وجود اینتگرون کلاس یک و دو مورد بررسی قرار گرفتند. برای بررسی تنوع ژنتیکی ایزوله های مقاوم به تتراسایکلین از تکنیک pfge (pulsed-field gel electrophoresis) استفاده شد. در مجموع تعداد 30 ایزوله epec در این مطالعه یافت شد که تنها یک ایزوله حاوی ژن bfpa بود و به عنوان تیپیک شناسایی شد. از بین 30 ایزوله (30%)9 حاوی اینتگرون کلاس یک و (6.6%) 2 حاوی اینتگرون کلاس دو بودند. تکثیر ناحیه داخلی در اینتگرون کلاس یک وجود دو کاست ژنی dfra7 و dfra1–aada1 را با باندهای به ترتیب 750bp و 1500bp در 44.4% و 33.3% از ایزوله های حاوی اینتگرون نشان داد. کاست های ژنی تکثیر شده در اینتگرون کلاس دو، واجد ژن های مقاومت dfra1-sat1-aada1 و dfra1-sat1 با باند های 1300bp و2500bp بودند. بیش ترین ژن های مقاومت به تتراسایکلین از نوعteta و tetb بود که هر کدام در 6 ایزوله (20%) یافت شدند. ژن tetc در دو ایزوله و ژن tetd تنها در یک ایزوله یافت شد. هیچ پالسوتایپ مشابهی در سویه های واجد اینتگرون و یا سویه های مقاوم به تتراسایکلین مشاهده نشد. نتایج این مطالعه نشان دهنده کاهش شیوع ایزوله های تیپیک و گرایش ایزوله ها به سمت آتیپیک شدن در میان ایزوله های epec در ایران است. شیوع اینتگرون کلاس یک در میان ایزوله ها نسبت به مطالعات انجام شده در سال های گذشته کاهش پیدا کرده است. نتایج ژنوتایپینگ نشان داد که ایزوله های epec مقاوم به تتراسایکلین جدا شده از کودکان مبتلا به اسهال یک جمعیت هتروژن را تشکیل می دهند.